正相柱清洗步驟

正相柱就是固定相極性比流動相極性大,對于正相柱,流動相極性越大,洗脫能力越強,出峰時間越快。正相柱一般用的流動相比較多的是正己烷

等非極性溶劑,水是強極性溶劑,正相色譜中用的量很少，水含量稍微一點的小變化，就會對出峰時間有很大的影響，所以正相色譜對水分含量

極敏感。正相填料，硅膠、氨基、CN 基等，本身并無特殊，也不是碰到水就會損壞的。

正相色譜柱清洗步驟：

1.每次清洗都用低流速起步，當檢測到柱壓穩定在一定水平后再增加流速。
2.先用10柱體積不含其它添加劑的流動相中的弱溶劑，如正己烷、氯仿等反沖色譜柱。
3.再用20柱體積的諸如二氯甲烷或異丙醇等流動相中的強溶劑反沖色譜柱。
4.100%異丙醇的極性和正相洗脫能力足夠把正相柱上的所有殘留物清洗掉。如果異丙醇的清洗還不足以恢復色譜性能，則說明色譜柱柱床

有塌陷和空洞了，用清洗的方法無法解決這個問題。色譜癥狀和清洗再生過后的色譜性能恢復情況往往能提供色譜柱真正存在問題的線索。

問：HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法

答：

1、樣品量不足：解決辦法為增加樣品量 

2、樣品未從柱子中流出：可根據樣品的化學性質改變流動相或柱子 

3、樣品與檢測器不匹配：根據樣品化學性質調整波長或改換檢測器 

4、檢測器衰減太多：調整衰減即可。 

5、檢測器時間常數太大：解決辦法為降低時間參數 

6、檢測器池窗污染：解決辦法為清洗池窗。 

7、檢測池中有氣泡：解決辦法為排氣。 

8、記錄儀測壓范圍不當：調整電壓范圍即可。 

9、流動相流量不合適：調整流速即可。 

10、檢測器與記錄儀超出校正曲線：解決辦法為檢查記錄儀與檢測器，重作校正曲線。